Mellitin CAS 20449-79-0

Хабермант повідомив, що 1 мкмоль/л пептиду бджолиної отрути може запобігти проліферації пухлинних клітин, але не пригнічує ріст і швидкість клонування нормальних клітин.

Власак та ін. використовували зворотну транскрипцію мРНК-ДНК для створення бібліотеки кДНК залози отрути бджолиної матки за допомогою плазміди pBR322. Вони виділили кДНК мелітину з цієї бібліотеки, використовуючи загальну мРНК залози отрути бджолиної матки як зонд, і далі клонували її в плазміду pUC18 для аналізу послідовності ДНК. Прогнозована послідовність мелітину за результатами аналізу послідовності ДНК була ідентичною фактично виміряній.

Чжан Цінвень почав витягувати РНК із залози отрути бджолиної матки для трансляції в яйцях бавовняної совки, успішно синтезував промелітин і вивчав екстраговані компоненти мРНК. Результати показали, що мРНК мелітину високої{1}}чистості можна отримати шляхом видалення рРНК із загальної РНК.

Арора порівняв антигіпоксичну здатність нормальних клітин печінки щурів з клітинами раку печінки щурів і підтвердив, що активована мелітином фосфоліпаза А2 (PLA2) може зменшити стійкість ракових клітин печінки до гіпоксії. DUnn та ін. злили ген антитіла SCFV, отриманий з мишачих антитіла до клітин мієломи людини та специфічних білків поверхні клітин лімфоми, з геном пептиду бджолиної отрути, щоб побудувати ген анти-токсину, який може вбивати пухлинні клітини. Злитий ген експресувався в кишковій паличці, а очищений анти-токсин продемонстрував свою ефективність у знищенні пухлинних клітин in vitro. Кіндас та ін. вилучили загальну мРНК з отруйних залоз незайманої бджолиної матки та виявили, що мРНК мелітину містить приблизно 400 пар основ і короткий поліА-хвіст. [9] Експерименти Haase показали, що мелітин може активувати клітинні ліпази, включаючи фосфоліпазу C (PLC), фосфоліпазу D (PLD), фосфоліпазу A2 (PLA2) і тригліцериди.

Лі Цзічжоу та ін. синтезував ген пептиду бджолиної отрути за допомогою зворотної транскрипції кДНК мРНК, використовуючи λ GT11, створив бібліотеку кДНК пептиду бджолиної отрути та відібрав позитивні клони, що експресують гемолітичний пептид бджолиної отрути, використовуючи зонди антитіл. Benachir та ін. використовували кальцеїн як флуоресцентний маркер для систематичного вивчення витоку мембрани, викликаного мелітином. Вважається, що прив'язка міжМелітіні везикул відбувається дуже швидко, і під дією мелітину деякі везикули вивільняють весь свій вміст, а інші залишаються неушкодженими. Коефіцієнт вивільнення вмісту пов'язаний з молярним співвідношенням мелітин/ліпіди. Зокрема, меліттин може розрізняти інтактні та вже ексудовані везикули, і це вказує на те, що присутність негативних зарядів на поверхні фосфоліпідного подвійного шару має інгібуючий вплив на літичну здатність мелітину, яка пропорційна щільності негативних зарядів.

Кубо та ін. порівняли мелітин з основними лужними білками еозинофілів, використовуючи п'ять методів цитотоксичного аналізу. Результати підтвердили, що мелітин може проникати в клітинну мембрану клітин K562 і утворювати пори, спричиняючи приплив Ca2+, збільшуючи внутрішньоклітинну концентрацію Ca2+ і лізис клітин. Протягом 1 години меліттин надає вбивчу дію на всі експериментальні клітини лейкемії. Шамшер та ін. виявили, що мелітин може активувати фосфоліпазу D і згодом лізувати клітини моноцитарної лейкемії людини (U937).

Ван Гуанлінь та ін. екстрагували загальну РНК із залоз бджолиної отрути та ампліфікували кДНК білка-попередника мелітину за допомогою ЗТ-ПЛР. Крім того, вони ввели сайти розщеплення аміну перед послідовністю мелітину шляхом цілеспрямованого мутагенезу та сконструювали послідовність, пов’язану з мелітином - Вектор експресії білка, мутованого пептидом бджолиної отрути, злитого з частковою послідовністю галактозидази, і результати аналізу послідовності показали, що вони успішно ввели цільовий кодон і були пов’язані з - Часткова послідовність галактозидази утворює правильну рамку зчитування і експресує мутагенний білок у Escherichia coli.

Huang Xueqiang та ін. спостерігали за проапоптозним ефектом мелітину на клітини лейкемії людини та виявили, що ефект 5 мг/мл мелітину на клітини лейкемії протягом 4 годин відрізнявся від ефекту протягом 4 годин μ. Типові апоптотичні характеристики спостерігалися після 24 годин обробки г/мл пептиду бджолиної отрути. Подальші експерименти показали, що його індукція клітинного апоптозу значно корелювала зі зниженням експресії гена bcl-2. Wang Qiubo та ін. шляхом штучного синтезу синтезували два олігонуклеотидні фрагменти АВ, що містять специфічні сайти розщеплення, та утворили цільовий ген під дією ферменту Кленова. Вони використали ендонуклеази рестрикції Hind III та Xmn I для одночасного розщеплення цільового гена та плазміди Pmal-p2 вектора експресії та сконструювали рекомбінант цих двох під дією лігази Т4. Додатковий скринінг використовувався для ідентифікації додаткових клонів, а також було проведено специфічне ферментне розщеплення та секвенування для отримання прокаріотичних експресійних клонів рекомбінантний пептид бджолиної отрути.

Liu Ling та ін. провели дослідження на трьох лініях клітин раку печінки, SMMC-7721, BEL-7402 і Hep-3B, використовуючи метод МТТ для дослідження зв’язку «доза-реакція» мелітину в інгібуванні пухлин. Результати показали, що інгібуюча дія мелітину на пухлини коливається від 8 до 64 мкм. При дозі г/мл швидкість інгібування пухлини мелітину зростає лінійно та демонструє значні протипухлинні ефекти in vitro. Виходячи з цього припущення, це може бути пов’язано із самоагрегацією мелітину у високих концентраціях. У високих концентраціях він здебільшого з’являється в тетрамерному стані, який ефективніше зв’язується з клітинною мембраною порівняно з мономерами, таким чином утворюючи іонні канали, змінюючи проникність мембрани, розтріскуючи клітинну мембрану та демонструючи сильний протипухлинний ефект in vitro.

Лі Бай, Чжан Чен та інші за допомогою генно-інженерних досліджень продемонстрували, що меліттин має ефект індукції апоптозу пухлинних клітин. Після трансфекції рекомбінантним аденовірусом, що містить ген мелітину, деякі клітини раку печінки показали морфологічні зміни, такі як апоптична морфологія, зменшення об’єму, округлість і агрегація країв хроматину під мікроскопією з інвертованим фазовим контрастом. Рекомбінантний аденовірус, що несе ген мелітину, може ефективно індукувати апоптоз у клітинах раку печінки зі швидкістю апоптозу близько 20%, що вище, ніж у контрольній групі без рекомбінантного аденовірусу та нетрансфікованого рекомбінантного аденовірусу. Це свідчить про те, що індукція апоптозу пухлинних клітин також є одним із механізмів, за допомогою яких працює генна терапія мелітином.

Чжао Яхуа та інші цілеспрямовано модифікували первинну структурну послідовність амінокислот у мелітині та експресованихМелітінгена шляхом експериментів. Спробуйте звести до мінімуму взаємодію між мелітином і бактеріальною мозковою оболонкою, головним чином через килимове вторгнення в мембрану, що викликає стерилізацію. У той же час, завдяки зміні числа зарядів і молекулярної конформації, ймовірність його амфіфільної взаємодії з клітинною мембраною крові значно знижується, завдяки чому досягається мета пригнічення гемолізу. Гемоліз модифікованої бджолиної отрути значно знижувався порівняно з активністю гемолізу стандартного зразка приблизно в 14,3 рази.

11 серпня 2009 року британська газета Daily Mail повідомила, що вчені Вашингтонського університету в США оприлюднили результати дослідження - за допомогою нанотехнологій вони розробили «нанобджолу», яку можна побачити лише під мікроскопом. «Маленькі бджілки» можуть проникати в ракові клітини, вивільняти пептиди бджолиної отрути та знищувати ракові клітини одну за одною. Маленька бджола також має всередині спеціальні позиціонуючі речовини, які можуть спрямовувати її по дорозі та безпосередньо досягати ураженої ділянки. В експерименті «нанобджола» зменшила кількість ракових клітин у мишей з раком молочної залози на 45%, а кількість ракових клітин у мишей з раком шкіри зменшилася на 75%.