Сефадекс G75це свого роду наповнювач гель -фільтрів з хорошою продуктивністю. Його готують зшиванням декстрану та епіхлорогідрином. Це гель у формі бісеру з великою кількістю гідроксильних груп, який легко набрякати у водних та електролітових розчинах. Максимальна межа виключення цієї сполуки становить 80000, а специфічний ступінь набряку залежить від кількості сухої смоли та умов експлуатації. Наприклад, за певних умов ступінь набряку сухої смоли може становити 519 мл/г. Коли діапазон операційних рН становить 6,210 (5.210 для деяких продуктів), сполука може залишатися стабільною. Рекомендується зберігати його при кімнатній температурі, прохолодному та подалі від світла в температурному діапазоні 430 градусів (або 425 градусів), щоб підтримувати свою продуктивність та стабільність. Ця речовина особливо підходить для великих біомолекул з молекулярною масою, що перевищує 80000. В основному використовується для опріснення та заміни буфера таких великих біомолекул. Завдяки кроку операції -, можна швидко зневажати, видалити забруднювачі та передавати молекули в новий буферний розчин. Окрім опріснення та заміни буфера, Sephadex G-75 також підходить для процесу очищення великих біомолекул.
 |
 |
Сефадекс G75- це гель декстрану, який в основному використовується для технології поділу та очищення в біохімії та молекулярній біології. Основні використання цієї речовини такі:
У процесі опріснення він може ефективно видалити солі (як правило, невеликі молекули неорганічні солі) з біологічних молекулярних розчинів. Перевага цієї речовини полягає в тому, що вона легко керувати, швидко і може досягти ефективного опріснення, не змінюючи активності біомолекул. Крім того, завдяки чудовій хімічній стабільності та біосумісності вона підходить для лікування опріснення різних біомолекул, включаючи білки, пептиди, нуклеїнові кислоти, у практичних застосуванні, гель -знесиття зазвичай поєднується з іншими технологіями очищення, такими як обмін іонами, ароматографія спорідненості тощо.
Ця речовина має широкий спектр застосувань у заміні буфера, особливо в галузі біохімії та молекулярної біології. Наприклад, в процесі очищення білка іноді необхідно переносити білки з однієї буферної системи в іншу буферну систему, яка більше підходить для їх стабільності та активності. І ця речовина може ефективно досягти цієї мети; У процесі екстракції нуклеїнової кислоти також необхідно відокремити нуклеїнову кислоту від розчину, що містить домішки та солі, та перенести її в новий буфер для подальших операцій. Це також застосовно до цього сценарію; Під час клітинної культури іноді необхідно замінити середовище або буфер культури для підтримки росту та активності клітин. Він може бути використаний для усунення шкідливих речовин зі старих культуральних засобів масової інформації або буферів та введення нових культуральних медіа або буферів.
Молекулярне просіювання
У процесах досліджень та підготовки білка зазвичай необхідно відокремити цільові білки від складних сумішей. Він може розділити білки на основі їх розміру, тим самим досягаючи очищення білка. Відрегулюючи умови елюції, такі як міцність іонів та значення рН елюента, ефективність поділу білків може бути додатково оптимізована. Окрім білків та нуклеїнових кислот, він також може бути використаний для поділу та очищення інших біомолекул, таких як полісахариди, ферменти, антитіла тощо. Хоча ця речовина не використовується безпосередньо як інструмент для визначення молекулярної ваги, вона може служити допоміжним інструментом при визначенні молекулярної ваги.
У процесі очищення білка зазвичай необхідно видалити домішки невеликих молекул, такі як солі, метаболіти невеликих молекул, незв'язані ліганди тощо з розчину білка. Ця речовина може ефективно видалити ці малі молекули з білкових розчинів, тим самим покращуючи чистоту білків. Її молекулярна ситова ефект дозволяє ефективно видаляти ці малі молекули домішки, що призводить до чистіших нуклеїнових кислот. Препарати ферменту, як правило, містять невеликі молекули, такі як прореагрені субстрати, інгібітори, метаболіти тощо. Ці домішки можуть впливати на активність та стабільність ферментів. Завдяки гель -фільтрації матеріалу ці невеликі молекулярні домішки можуть бути ефективно видалені, а чистоту препарату ферменту можна вдосконалити. Крім білків та нуклеїнових кислот,
Імітувати міжклітинну передачу сигналу
Інтердукція міжклітинного сигналу є основним регуляторним механізмом життєвої діяльності, що включає складні процеси, такі як розпізнавання клітин, перетворення сигналу та фізіологічна реакція. Традиційні дослідження часто покладаються на моделі живих клітин, але існують такі обмеження, як складні сигнальні мережі та численні перешкоджаючі фактори.Сефадекс G75є класичним середовищем фільтрації гелів Dextran. Його пориста структура та ефект молекулярного сито забезпечують унікальну фізичну модель для моделювання міжклітинної трансдукції сигналу.
Фізична модель моделювання міжклітинної передачі сигналу за допомогою Sephadex G-75
Моделювання міжклітинних розривів
GAP -перехід - це гідрофільний канал, утворений між сусідніми клітинами через лінкер, що дозволяє вільно обміняти невеликі молекули з молекулярною масою<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Формування градієнта молекул сигналу: різні концентрації молекул сигналу (наприклад, табір, Ca ²+) завантажуються в гелеву колонку. Різниця швидкості дифузії малих молекул у гель -порі можна спостерігати за допомогою молекулярного ситового ефекту, і градієнтна передача хімічних сигналів між клітинами може бути модельована.
Моделювання синергетичного відповіді: дві взаємодіючі молекули (такі як ліганд та рецептор) завантажуються відповідно на обох кінцях гелевої колони, і їх кінетика зв'язування аналізується через різницю в часі елюції для моделювання процесу молекулярного розпізнавання в прямому контактному зв'язку між клітинами.
Моделювання молекулярного контакту на поверхні мембрани
Зв'язок між молекулами поверхні мембрани залежить від специфічних взаємодій поверхневих білків клітинної мембрани. Sephadex G-75 може імітувати цей процес за допомогою функціональної модифікації:
Експеримент з зв'язуванням рецепторів: біотинільні білки рецепторів (наприклад, EGFR) фіксуються на поверхні гелевих частинок, флуоресцентні мічені ліганди (наприклад, EGF) фіксуються через систему біотину стрептавідин, а інтенсивність сигналу зв'язування контролюється за допомогою флюоресцентної детектора для кількісного визначення спорідненості рецептора ліганду.
Конкурентний аналіз зв'язування: попереднє завантаження комплексу лігандів рецепторів у гель -колонці, додайте конкурентні інгібітори різних концентрацій (таких як антитіла проти EGFR), обчислюйте константу інгібування (KI) через зсув пікового елюції та імітуйте ефект втручання наркотиків на шляхи клітинного сигналу.
Моделювання передачі хімічного сигналу
Передача хімічного сигналу спирається на дифузію хімічних сигнальних молекул (таких як гормони та цитокіни), що секретуються клітинами через рідини організму або позаклітинну матрицю для клітин -мішеней. Sephadex G - 75 може побудувати тривимірну дифузійну модель:
Моделювання паракринної системи: секреторні клітини (такі як макрофаги) та клітини -мішеней (такі як Т -клітини) відповідно інкапсульовані в гель -мікросфер, а стан активації клітин -мішеней (наприклад, експресія CD69) спостерігається через культуру СО для імітації локального ефекту паракринних сигналів.
Передача ендокринного сигналу: Флуоресцентні мічені гормони (такі як інсулін) завантажуються в гелеву колонку, і їх взаємодія з гелевими порами аналізується через час елюції, а половина - життя гормонів у крові та розподіл цільових органів прогнозується шляхом поєднання математичних моделей.
Випадок застосування Sephadex G-75 в дослідженні сигналізації клітин
Дослідження трансдукції сигналу еритроцитів та функції інтегрину
Інтецептор адгезії тромбоцитів IIB 3 є найпоширенішим глікопротеїном на поверхні мембрани тромбоцитів і має вирішальне значення для гемостазу та утворення тромбу. Вивчіть використання Sephadex G-75 для імітації взаємодії між тромбоцитами та субендотеліальним колагеном:
Модель активації інтегрину: очищений інтегрин IIB 3 фіксували на поверхні гелевих частинок, а розчинний фібриноген (FG) додавали як ліганд. Кінетика зв'язування була виявлена за допомогою поверхневого плазмонового резонансу (SPR). Було встановлено, що спорідненість інтегрину до ФГ після активації значно покращилася (КД зменшувався з μ M до NM).
Скринінг антитромбоцитарних препаратів: Комплекс FG з попереднім завантаженням в гелевому колонці, додайте антитромбоцитарні препарати різних концентрацій (таких як тирофібан), обчисліть швидкість гальмування препаратів на активність інтегрину шляхом переміщення піку елюції та забезпечують високу - пропускну платформу для розробок нових антитромботичних препаратів.
Регулювання сигнальних шляхів, пов'язаних з пухлиною
Пухлинні клітини сприяють проліферації та метастазах через аномальну активацію сигнальних шляхів, таких як MAPK та PI3K/Akt. Sephadex G-75 може бути використаний для виділення та очищення ключових білків у сигнальних шляхах:
Дослідження сигнального шляху EGFR: білок EGFR очищали за допомогою гель-фільтрації Sephadex G-75, а його стан фосфорилювання аналізували за допомогою мас-спектрометрії. Було встановлено, що рівень фосфор
Аналіз механізму резистентності до лікарських засобів: в препараті - стійкі ракові клітини раку шлунка (SGC7901/vcr) білок UHRF1 виділяли та очищали Sephadex G-75, і було встановлено, що його надмірна експресія може інгібувати активацію білка, пов'язаного з апоптозом, (наприклад, CASPase-3), зменшити хіміотерапію препарату, що стосується хіміотерапії.
Імунна клітинна сигналізація та регуляція полісахариду
Полісахариди червоних водоростей (BFP) посилює імунну відповідь шляхом активації NF - κ B та MAPK сигнальних шляхів у макрофагах. Дослідження розділення та очищення BFP та його компонентів (F1, F2, F3) з використанням Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% були отримані за допомогою гель-фільтрації Sephadex G-75 у поєднанні з хроматографією іонної біржі Deae 52, а їх молекулярні ваги становили 120 кДа, 85 кДа, 60 кДа та 45 кДа відповідно.
Активація шляху сигналу: У моделі макрофагів RAW264.7 BFP та її компоненти можуть суттєво індукувати секрецію NO та TNF -, а його механізм включає NF - κ B ядерної транслокації та фосфорилатури JNK, ERK та P38 MAPK. Очищені компоненти, розділені Sephadex G - 75, показали, що F1 мав найсильніший ефект активації на NF - κ B та MAPK -шляхи (збільшуючи виробництво NO в 2,5 рази та TNF - секрецію на 3 рази).
Популярні Мітки: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, постачальники, виробники, фабрика, оптова торгівля, купівля, ціна, масова, на продаж