Іптг порошокможе використовуватися для місцевої анестезії, застосовується як засіб для розповсюдження для після-полегшення болю в ранах і виразці. Молекулярні біологічні реагенти, які зазвичай використовуються для скринінгу синіх і білих плям і експресії білка в бактеріях, індукованої IPTG. IPTG, повна назва ізопропіл- - D-тіогалактозид, CAS 367-93-1, молекулярна формула C9H18O5S, молекулярна маса 384,37 Дальтон, відноситься до маломолекулярних сполук. Білий або майже білий порошок, погано розчинний у воді, але краще розчинний в органічних розчинниках. У молекулах є іонні групи, тому вони мають певний ступінь провідності у воді. Стабільний при кімнатній температурі, але легко розкладається під дією високої температури або сильних кислот і лугів. Немає явного запаху, але під час використання може виділятися легкий запах органічних сполук. Це широко використовуваний індуктор, який використовується для індукції експресії білка в бактеріях. У медичній діагностиці IPTG може служити флуоресцентним зондом або хромогенним агентом для виявлення специфічних молекул або тканин у зразках. Поєднуючись із цільовими молекулами, IPTG може генерувати флуоресцентні сигнали або змінювати колір, забезпечуючи надійну підтримку діагностики захворювання.
|
Морфологічний |
Кристалічний порошок |
|
Колір |
Білий |
|
Температура плавлення |
105 градусів С |
|
Температура кипіння |
350,9 градусів C (приблизна оцінка) |
|
Щільність |
1,3329 (приблизна оцінка) |
|
Умови зберігання |
2-8 градусів Цельсія |
|
розчинність спирту |
розчиннийрозчинний 40 частин розчинника |
|
Коефіцієнт кислотності (pKa) |
13.00 ± 0.70 (Прогнозовано) |
|
Розчинний у воді |
50 мг / мл |
|
Температура спалаху |
197,8 градусів |
|
Розчинність |
1.6g/l |
|
Щільність пари |
5,21 (проти повітря) |
|
Показник заломлення |
1,5060 (приблизно) |
|
|
|
порошок Iptg,Фізичні параметри, Мп. : 114 ~ 121 градус C, опис використання, звичайні молекулярно-біологічні реагенти, які зазвичай використовуються в синьо-білому скринінгу та IPTG-індукованій експресії білка в бактеріях. , Характеристики упаковки , 1G, 5G, 25G, 100G, 1KG , Умови зберігання
Охолодження 2-8 градусів, захищене від світла, Опис небезпеки, Код небезпеки: Xi, Рівень ризику: R36 / 37 / 38, Рівень безпеки: S23-24 / 25-36.
IPTG зазвичай використовується в експериментах із клонування, які потребують індукції активності -галактозидази. Його часто використовують у поєднанні з X-Gal або Bluo-Gal для синьо-білого скринінгу рекомбінантних бактеріальних колоній, які можуть бути індуковані Chemicalbook для експресії lac-оперону в E. coli. IPTG зв’язується з білком-репресором lacI і змінює його конформацію, щоб запобігти інгібуванню гена lacZ, який кодується -галактозидазою.
IPTG, повна назва ізопропіл- -D-тіогалактозид, є широко використовуваним індуктором, який широко використовується для індукції та регуляції експресії білка. Завдяки своїй унікальній структурі та функції IPTG зазвичай готують з використаннямІптг порошокметоди синтезу в лабораторії.
Синтетичний маршрут
1. Синтез глікозидів:
Перший синтез -D-тіогалактозид зазвичай синтезується методом синтезу глікозидів шляхом конденсації галактози з відповідними основами (такими як ізопропіл). Цей крок вимагає використання захисних груп, щоб уникнути утворення побічних -продуктів у наступних реакціях.
2. Реакція фосфорилювання:
На основі синтезу глікозидів фосфатні групи вводяться через реакцію фосфорилювання для отримання ізопропілової групи- -D-тіогалактозид-5'-фосфатного ефіру. Цей етап вимагає використання фосфатів і відповідних ангідридів або кислот.
3. Група зняття захисту:
За допомогою реакції зняття захисної групи захисну групу в глікозиді видаляють, щоб отримати цільовий продукт ізопропіл- - D-тіогалактозид. Цей етап вимагає використання розчину кислоти або лугу для полегшення реакції.
Експериментальні етапи:
Підготувати реактиви та інструменти:
Підготуйте необхідні цукри, основи, захисні групи, фосфати, ангідриди або кислоти, розчинники та інші реактиви, а також необхідні експериментальні прилади, такі як мішалки, термометри, спектрофотометри тощо.
Синтез глікозидів:
Нагрійте та перемішайте галактозу з відповідними основами в розчиннику, додайте каталізатор і сприяйте реакції конденсації. Ця стадія вимагає суворого контролю температури та часу перемішування, щоб забезпечити плавний хід реакції.
Реакція фосфорилювання:
Синтезовані глікозиди нагрівають і змішують з фосфатом, ангідридом або кислотою в розчиннику, а також додають каталізатор для стимулювання реакції фосфорилювання. Цей етап вимагає контролю температури та часу перемішування, звертаючи увагу на полярність і дозування розчинника, щоб забезпечити перебіг реакції та утворення продукту.
Група зняття захисту:
Видаліть захисну групу з продукту фосфорилювання в розчині кислоти або лугу, щоб отримати цільовий продукт ізопропіл- - D-тіогалактозид. Цей етап вимагає контролю значення рН і температури, звертаючи увагу на полярність і дозування розчинника, щоб забезпечити перебіг реакції і утворення продукту.
Розділення та очищення:
Цільовий продукт відокремлюють від реакційної суміші за допомогою колонкової хроматографії, перекристалізації та інших методів розділення та очищення. Цей етап вимагає уваги до робочих умов, таких як температура, дозування розчинника, швидкість потоку тощо, щоб забезпечити чистоту та вихід продукту.
Аналіз та ідентифікація:
Структурна ідентифікація цільового продукту здійснюється за допомогою аналітичних методів, таких як ядерний магнітний резонанс і мас-спектрометрія. Цей етап вимагає використання відповідних приладів, обладнання та технічних засобів для підтвердження структури та чистоти продукту.
Іптг порошокповна назва ізопропіл- - D-тіогалактозид — широко використовуваний індуктор, який широко використовується для індукції та регулювання експресії білка.
1. Індукція експресії білка:
IPTG відіграє важливу роль в індукції експресії білка. Це широко використовуваний індуктор, який може ефективно індукувати експресію специфічних генів у бактеріях, отримуючи таким чином бажаний цільовий білок за короткий період часу. Його механізм дії полягає у зв’язуванні з геном lacI бактерії, пригніченні активності його транскрипційного регуляторного білка, тим самим відкриваючи lac-оперон бактерії та ініціюючи експресію цільових генів. При використанні оперонів лактози як промоторів для експресії білка необхідні індуктори, і IPTG може діяти як аналог лактози для індукування експресії галактозидази в Escherichia coli. Він не може бути використаний клітинами для досягнення тривалої експресії. IPTG зв'язується з lac|продуктів, викликаючи конформаційні зміни від lacO, тим самим активуючи транскрипцію. Це індуцибельне регулювання транскрипції стало загальновживаним елементом у конструюванні векторів системи експресії E. coli.
2. Регуляція експресії генів:
IPTG відіграє важливу роль у регуляції експресії генів. Як важливий експериментальний реагент, він відіграє важливу роль у регуляції експресії генів та експериментах із надекспресією білка. Контролюючи час додавання та концентрацію IPTG, можна досягти регулювання експресії цільового білка. Цей регуляторний ефект заснований на зв'язуванні IPTG з lac|продуктів в оперонах лактози, змінюючи їхню конформацію, тим самим залишаючи lacO та додатково активуючи транскрипцію. Цей індуцибельний механізм регуляції транскрипції робить IPTG дуже важливим у таких галузях досліджень, як функція генів, взаємодія білків і скринінг ліків.
3. Кристалізація білка:
В експериментах з кристалізації білка IPTG використовується як індуктор для стимулювання кристалізації білка. Його механізм дії полягає у зміні конформації білків шляхом зв’язування з гідрофобними ділянками в білках, таким чином сприяючи агрегації та кристалізації між білковими молекулами. Цей процес агрегації та кристалізації є оборотним, тому кристалізацію білка можна індукувати шляхом додавання IPTG, або кристали білка можна розчинити шляхом видалення IPTG.
В експериментах з кристалізації білка IPTG зазвичай додають до розчину білка в кінцевій концентрації 1 мМ. Така низька концентрація IPTG дозволяє уникнути надмірної індукції білків, тим самим досягаючи кращих ефектів кристалізації. У той же час IPTG також може служити молекулярним шапероном, щоб допомогти правильному згортанню та агрегації білків, отримуючи таким чином більш однорідні білкові кристали.
Слід зазначити, що ІПТГ не у всіх випадках сприяє кристалізації білка. Деякі білки не чутливі до IPTG, або через їх природну структуру та властивості, які не підходять для кристалізації, необхідні експериментальна перевірка та оптимізація для різних білків, щоб визначити оптимальні умови та методи кристалізації.
Побічні реакції
цитотоксичність
Токсичність для прокаріотичних клітин
Хоча IPTG зазвичай використовується для індукції експресії генів у прокаріотичних клітинах, високі концентрації IPTG можуть мати токсичну дію на прокаріотичні клітини. Дослідження показали, що коли концентрація IPTG занадто висока, це може перешкоджати нормальним метаболічним процесам у клітинах. Наприклад, це може впливати на енергетичний метаболізм клітин, перешкоджати таким шляхам, як гліколіз і цикл трикарбонових кислот, що призводить до зниження внутрішньоклітинного виробництва АТФ і впливає на ріст і проліферацію клітин. Крім того, високі концентрації ІПТГ можуть також пошкодити цілісність клітинної мембрани, підвищити її проникність, призвести до витоку внутрішньоклітинних речовин і дозволити шкідливим речовинам із позаклітинного середовища проникнути в клітину, тим самим викликаючи загибель клітини. Експерименти виявили, що при культивуванні Escherichia coli в середовищі, що містить високі концентрації ІПТГ, швидкість росту бактерій значно сповільнюється, а кількість життєздатних бактерій поступово зменшується зі збільшенням часу культивування. Це вказує на те, що високі концентрації ІПТГ мають певну пригнічувальну та знищувальну дію на Escherichia coli.
Токсичність для еукаріотичних клітин
Окрім прокаріотичних клітин, IPTG також може бути токсичним для еукаріотичних клітин. Існують певні відмінності в структурі та функціях між еукаріотичними та прокаріотичними клітинами, але IPTG все ще може впливати на нормальні фізіологічні функції еукаріотичних клітин різними шляхами. З одного боку, IPTG може заважати шляхам передачі сигналу в еукаріотичних клітинах. Передача сигналу в клітинах відіграє вирішальну регуляторну роль у таких процесах, як ріст, диференціація та апоптоз. IPTG може змінювати інтенсивність і напрямок передачі сигналу шляхом взаємодії з певними сигнальними молекулами в клітинах, тим самим впливаючи на нормальну фізіологічну діяльність клітин.
Токсичність для еукаріотичних клітин
З іншого боку, IPTG може індукувати відповідь на окислювальний стрес в еукаріотичних клітинах. Окислювальний стрес відноситься до дисбалансу між внутрішньоклітинним окисленням і антиоксидантною активністю, що призводить до збільшення виробництва активних форм кисню (АФК). Надмірна кількість АФК може атакувати такі біомолекули, як ДНК, білки та ліпіди всередині клітини, викликаючи клітинне пошкодження та функціональні порушення. Дослідження виявили, що за певних умов обробка еукаріотичних клітин IPTG значно підвищує внутрішньоклітинні рівні АФК, що супроводжується зниженням життєздатності клітин і збільшенням швидкості апоптозу. Це свідчить про те, що IPTG може викликати реакцію на окислювальний стрес і чинити токсичну дію на еукаріотичні клітини.
Популярні Мітки: порошок iptg cas 367-93-1, постачальники, виробники, фабрика, опт, купити, ціна, оптом, продаж