Тіазоліловий синій CAS 298-93-1

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. є одним із найдосвідченіших виробників і постачальників тіазолілового синього cas 298-93-1 у Китаї. Ласкаво просимо до оптової оптової торгівлі високоякісним тіазоліловим синім cas 298-93-1 для продажу тут з нашої фабрики. Хороший сервіс і доступні ціни.

Тіазоліловий синій, більш відомий як MTT (3-(4,5-диметилтіазол-2-іл)-2,5-дифенілтетразолію бромід), містить захоплюючу подвійність — це водночас життєво важливий інструмент у клітинній біології та хамелеонова хімічна дивина. Цей жовтий кристалічний порошок зазнає приголомшливої ​​метаморфози в живих клітинах: мітохондріальні редуктази розщеплюють його тетразолієве кільце, перетворюючи його на нерозчинний фіолетовий осад формазану — реакція настільки візуально вражаюча, що вона стала золотим стандартом для вимірювання життєздатності клітин. Проте поза лабораторним столом MTT розкриває більш езотеричну поведінку; його кристалічна структура утворює своєрідні візерунки «ялинки» під мікроскопом, тоді як його окисно-відновні властивості дозволяють йому брати участь в екзотичних фотохімічних реакціях під впливом певних довжин хвиль світла. Цікаво, що сполука демонструє рідкісне явище під назвою «метахромазія» — поява різних кольорів залежно від концентрації та молекулярного середовища — властивість, яку колись використовували текстильні хіміки для створення «розумних» барвників. Нещодавні дослідження виявили його несподівану роль як слабкого інгібітора певних ферментів дихального ланцюга, натякаючи на те, що цей всюдисущий тестовий реагент, можливо, непомітно впливав на метаболічні процеси, для вивчення яких вчені використовували його. При розчиненні в органічних розчинниках розчини МТТ виявляють незвичайний ефект гасіння флуоресценції, який спантеличив фізикохіміків, припускаючи складні міжмолекулярні взаємодії, які все ще чекають повного пояснення.

Тіазоліловий синійХімічна назва - 3-(4,5-диметил-2-тіазол) -2,5-дифенілтетразолію бромід, скорочено МТТ, який є важливою органічною сполукою. З того часу, як у 1983 році Мосман вперше повідомив про використання фарбування MTT для визначення росту та виживання клітин, MTT широко застосовувався в таких галузях, як науки про життя, медичні дослідження та розробка ліків. Нижче наведено детальне пояснення його призначення:

Застосування в дослідженнях клітинної біології

 

МТТ є одним із класичних методів визначення проліферації клітин. Під час культивування клітин дегідрогенази, такі як сукцинатдегідрогеназа в мітохондріях живої клітини, можуть відновлювати екзогенний МТТ до нерозчинного блакитно-фіолетового кристалічного формазану, який осідає в клітині. Мертвим клітинам не вистачає цієї відновної здатності, тому вони не виробляють формазан. Розчинивши формазан у клітинах і вимірявши значення його поглинання світла на певних довжинах хвиль (наприклад, 490 нм або 562 нм) за допомогою пристрою для зчитування -імуноферментного аналізу (ELISA), кількість живих клітин можна опосередковано відобразити. У межах певного діапазону кількості клітин кількість утворених кристалів МТТ пропорційна кількості клітин, тому проліферацію клітин можна визначити на основі виміряного значення абсорбції (значення OD).

Застосування в дослідженнях клітинної біології

 

MTT також можна використовувати для визначення токсичності ліків або інших методів лікування (таких як радіаційне опромінення) на культивованих клітинах in vitro. Шляхом порівняння значень ОП групи лікування та контрольної групи можна оцінити вплив ліків або методів лікування на активність клітин. Чим більше значення OD, тим сильніша активність клітини; Навпаки, це вказує на те, що слабша активність клітини або більша токсичність клітини. Цей метод має широке застосування у скринінгу ліків, токсикологічних дослідженнях та інших галузях. Хоча MTT в основному використовується для вимірювання клітинної проліферації та цитотоксичності, у деяких випадках його також можна використовувати для дослідження апоптозу клітин. Під час процесу клітинного апоптозу активність ферменту всередині клітини змінюється, що може вплинути на відновну здатність МТТ. Шляхом порівняння різниці в значеннях OD між апоптичними клітинами та нормальними клітинами можна попередньо визначити виникнення клітинного апоптозу. Однак слід зазначити, що MTT не є спеціалізованим методом виявлення апоптозу клітин, і його результати потребують комплексного аналізу разом з іншими методами виявлення апоптозу.

Застосування в розробці ліків

 

У процесі розробки ліків аналіз MTT є широко використовуваним високопродуктивним-методом скринінгу ліків. Шляхом спільної інкубації досліджуваного препарату з клітинами та використання МТТ-аналізу для вимірювання змін активності клітин можна швидко виявити потенційно активні молекули препарату. Цей метод має такі переваги, як простота експлуатації, надійні результати та висока пропускна здатність, а також має важливе застосування на ранній стадії розробки ліків. МТТ-тест також можна використовувати для вивчення механізму дії ліків. Порівнюючи зміни клітинної активності при різних умовах медикаментозного лікування, можна попередньо визначити вплив препаратів на такі процеси, як клітинна проліферація та апоптоз. Поєднуючи інші методи молекулярної біології, такі як вестерн-блот і проточна цитометрія, можна додатково виявити мішені та сигнальні шляхи ліків. При оцінці безпеки лікарських засобів аналіз МТТ може бути використаний для оцінки токсичного впливу ліків на клітини. Вимірюючи зміни значення OD клітин після лікування препаратом, можна визначити, чи має препарат цитотоксичність і силу токсичності. Це має велике значення для керівництва доклінічними дослідженнями та клінічним застосуванням ліків.

Застосування МТТ в інших сферах

 

В імунологічних дослідженнях МТТ-тест можна використовувати для визначення здатності лімфоцитів до проліферації. Шляхом спільної інкубації лімфоцитів з антигенами або імуностимуляторами та вимірювання змін активності клітин за допомогою аналізу МТТ можна оцінити здатність лімфоцитів до імунної відповіді. Цей метод має широке застосування в розробці вакцин, імунотерапії та інших областях. У онкологічних дослідженнях МТТ-аналіз можна використовувати для визначення активності проліферації та чутливості пухлинних клітин до ліків. Шляхом порівняння змін значень оптичної щільності пухлинних клітин за різних умов медикаментозного лікування можна перевірити молекули ліків, які інгібують пухлинні клітини, і оцінити їхні проти-пухлинні ефекти. Це має велике значення для керівництва клінічним лікуванням пухлин. У токсикологічних дослідженнях навколишнього середовища аналіз MTT можна використовувати для оцінки токсичного впливу забруднюючих речовин навколишнього середовища на клітини. Шляхом спільної інкубації клітин з різними концентраціями забруднюючих речовин і вимірювання змін активності клітин за допомогою МТТ-аналізу можна визначити токсичність і механізм дії забруднюючих речовин. Це має велике значення для оцінки екологічних ризиків забруднювачів навколишнього середовища та формування політики охорони навколишнього середовища. 

Експериментальні етапитіазоліловий синійметод:

1: Трипсин розщеплює клітини в логарифмічній фазі, центрифугує та збирає їх після припинення, щоб зробити клітинну суспензію, і регулює його концентрацію до 5-10 за кількістю клітин × 104/мл. Для початківців необхідно зробити так, щоб клітини досягли 5-10 × 104/мл, часто не знають, з чого почати. Я тут, щоб надати вам простий метод початкового визначення кількості комірок.

Візьмемо для прикладу площу 25 см2, яка зазвичай використовується для культури клітин:

1) Щільність клітин приблизно 80%~90% (на малюнку нижче показано приблизний стан клітин при щільності 80%~90%). Після розщеплення та центрифугування видаліть супернатант і додайте 3 мл середовища для перемішування.

2) Візьміть нову стерильну центрифужну пробірку на 15 мл (для наступного етапу інокуляції 96-лункового планшета) і заповніть її приблизно 9 мл середовища.

3) Візьміть 1 мл із 3 мл суспензії клітин, приготовленої на першому кроці, додайте її у верхню пробірку та підрахуйте клітини після змішування. У цей час зазвичай становить 5-10 або менше × 104/мл, що еквівалентно 5-10 клітинам на клітинку в 4 клітинках дошки для підрахунку клітин (див. малюнок нижче); Якщо концентрація недостатня, необхідно додати клітинну суспензію відповідно до результату підрахунку, і кожна крапля повинна бути розрахована як 50 мкл.

4) Кількість комірок слід регулювати відповідно до різних цілей експерименту. Наприклад, у загальному експерименті проліферації клітин можна використовувати 2000 клітин на лунку (еквівалентно щільності клітинної суспензії 2 × 104/мл), від 5000 до 10000 клітин на лунку (еквівалентно щільності клітинної суспензії 5 × 104/мл). Крім того, кількість клітин також слід визначати відповідно до їх власних особливостей, наприклад швидкості росту. Наприклад, щільність клітин, що ростуть швидше, може бути трохи меншою.

2. Після приготування клітинної суспензії обережно перемішайте її та додайте 100 мкл у кожну лунку, щоб щільність досліджуваних клітин становила 5000-10000/лунку (край лунки заповнено стерильним PBS).

L Примітка: Оскільки клітини продовжуватимуть осідати після змішування, необхідно багаторазово перемішувати під час процесу інокуляції, наприклад, змішувати один раз на кожні шість лунок, щоб переконатися, що щільність клітин інокуляції є абсолютно однаковою між лунками, що має вирішальне значення для результатів MTT.

3. Помістіть інокульований планшет з культурою клітин в інкубатор для культивування, доки клітинний моношар не буде покрито дном лунки (плоска пластина з 96 лунками), і додайте препарат з градієнтом концентрації. В принципі, препарат можна додати після того, як клітина прикріплена до стіни, або через дві години, або через півдня, але часто ми додаємо препарат у другій половині дня попереднього дня, а наступного ранку. Зазвичай встановлюється 5-7 градієнтів, 100 мкл на отвір і 3-5 кількох отворів. Рекомендується встановлювати 6, інакше важко відобразити реальну ситуацію. Наведений нижче малюнок можна використовувати як еталонний крок для пластини з 96 отворами.

L Для дозування деякі люди безпосередньо додають ліки в 96-лункові планшети різними об’ємами для формування градієнта концентрації. Але я думаю, що ми повинні спробувати змішати різні концентрації ліків у пробірці EP, потім видалити супернатант культури з 96-лункового планшета (який можна відсмоктати за допомогою розрядного пістолета) і додати 100 мкл культурального середовища, що містить різні концентрації ліків, що може забезпечити точність концентрації ліків. Крім того, слід зазначити, що якщо використовується цей метод, не висмоктуйте весь культуральний розчин 96-лункового планшета перед додаванням ліків. Ви повинні додати зразки відразу після відсмоктування частини, щоб уникнути загибелі клітин через висихання 96-лункового планшета.

Інкубуйте з 4,5% CO2 при 37 градусах протягом 16-48 годин і спостерігайте за ефектом препарату під інвертованим мікроскопом. На наступному малюнку показано типовий градієнт цитотоксичності препарату.

4. Додайте 10 мкл розчину МТТ (5 мг/мл, тобто . 0.5% МТТ) до кожної лунки та продовжуйте культивування протягом 4 годин. Якщо препарат може реагувати зтіазоліловий синійкультуральний розчин можна викинути після центрифугування, а культуральний розчин, що містить MTT, можна додати після промивання PBS 2-3 рази.

5. Зупиніть культуру та підготуйтеся до розчинення та кристалізації.

Тіазоліловий синій, китайська назва якого метиловий синій, є важливою органічною сполукою, яка широко використовується в медицині, біології та хімії. у медицині він часто використовується для лікування отруєння нітритами, отруєння ціанідами тощо, а також використовується для діагностики та допоміжного лікування деяких захворювань; у біологічних дослідженнях його можна використовувати як фарбувальний агент для мічення клітин або тканин. Однак, як і багато ліків, метиленовий синій також може мати низку побічних ефектів під час використання:

Побічні ефекти з боку травної системи

Нудота і блювота є одними з поширених побічних ефектів травної системи метиленового синього. Коли метиленовий синій потрапляє в організм, він може стимулювати слизову оболонку шлунково-кишкового тракту, викликаючи нудоту і навіть блювоту у важких випадках. Цей симптом більш виражений, якщо швидкість внутрішньовенної ін’єкції занадто висока або доза занадто велика. Наприклад, у деяких клінічних випадках пацієнти можуть відчувати значну нудоту та блювання незабаром після швидкої внутрішньовенної ін’єкції метиленового синього, що впливає на їхній комфорт і досвід лікування. Деякі пацієнти можуть відчувати біль у животі після використання метиленового синього, і ступінь болю може змінюватись залежно від індивідуальних відмінностей, починаючи від легкого дискомфорту до більш сильного болю.

У той же час це також може супроводжуватися діареєю, яка може бути наслідком впливу метиленового синього на перистальтику кишечника та функцію травлення, що призводить до ненормального руху кишечника та змін у секреції травної рідини. Тривала або часта поява болю в животі та діареї не тільки впливає на засвоєння поживних речовин і фізичне здоров’я пацієнта, але також може призвести до інших ускладнень.

Побічні ефекти сечостатевої системи

Після застосування метиленового синього колір сечі стає синім, що пов’язано з виведенням метиленового синього та його метаболітів із сечею через нирки. Загалом ця зміна кольору сечі є тимчасовою і не матиме серйозного впливу на фізичне здоров’я. Але в деяких особливих випадках, наприклад у пацієнтів із захворюваннями сечовидільної системи, зміна кольору сечі може перешкодити діагностиці захворювання, і лікарям необхідно провести комплексний аналіз за іншими показниками обстеження. Під час сечовипускання деякі пацієнти можуть відчувати поколювання в отворі уретри.

 

Це може бути пов’язано зі стимулюючою дією метиленового синього на слизову уретри, особливо коли концентрація сечі висока або слизова уретри натирається під час сечовипускання, відчуття поколювання буде більш вираженим. Цей симптом може доставляти пацієнтам певний дискомфорт і впливати на їх повсякденне життя.

Неврологічні побічні ефекти

Запаморочення та головний біль є поширеними неврологічними побічними ефектами метиленового синього. Після використання метиленового синього пацієнти можуть відчувати запаморочення та дезорієнтацію в голові або відчувати дискомфорт, наприклад набряк і біль у голові. Цей симптом може вплинути на увагу та мислення пацієнта, а також знизити ефективність роботи та життя. Виникнення запаморочення та головного болю може бути пов’язане з впливом метиленового синього на кровоносні судини та нерви мозку, і конкретний механізм ще потребує подальших досліджень. У рідкісних випадках метиленовий синій може викликати розлади свідомості, такі як сонливість, кома та ін.

Зазвичай це пов’язано з надмірним використанням метиленового синього або надмірною чутливістю пацієнтів до препарату, що викликає сильне пригнічення центральної нервової системи. Розлади свідомості є серйозним побічним ефектом, який може загрожувати безпеці життя пацієнта та потребує негайного лікування.

1. Яке застосування тіазолілового синього тетразолію броміду?

Тіазоліловий синій Тетразолієвий синій (MTT) можна використовувати для вимірювання клітинної проліферації. МТТ утворює жовтуватий розчин, який мітохондріальними дегідрогеназами живих клітин перетворюється на темно-синій,-нерозчинний у воді формазан МТТ.

2. Чи безпечно зберігати Thiazolyl Blue?

Температурні умови: герметично закрийте порошок і зберігайте його в холодильнику при температурі -20 градусів для заморожування, що може ефективно подовжити термін придатності (зазвичай 1–2 роки); для короткочасного зберігання (протягом 1 місяця) можна тимчасово зберігати при температурі 4 градуси.

Вимоги до світло-і волого-непроникності: порошок MTT світло-чутливий і його слід зберігати в коричневих пляшках із реагентами або прозорих пляшках, обгорнутих олов’яною фольгою. Тим часом слід додати осушувачі (наприклад, силікагель), щоб запобігти поглинанню вологи та злежуванню порошку.

3. Чи зміниться колір Thiazolyl Blue?

Коли розчин виділяє синьо-фіолетовий осад або темніє, це вказує на те, що він окислився і його не можна використовувати далі.
Уникайте розміщення розчину при кімнатній температурі або в освітленому середовищі, оскільки він може швидко вийти з ладу.

Популярні Мітки: тіазоліловий синій кас 298-93-1, постачальники, виробники, фабрика, опт, купити, ціна, оптом, продаж