Ретатрутид(посилання:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) – це хімічно синтезований поліпептидний агоніст тривалої дії GLP-1R/GIPR/GCGR, який призначений для лікування діабету 2 типу у дорослих, контролю ваги та неалкогольного жирового гепатиту печінки/неалкогольного стеатогепатиту. 29 серпня 2023 року показання для лікування діабету 2 типу у дорослих схвалено для клінічного застосування. Крім того, заявка на клінічну реєстрацію показань для лікування неалкогольного жирового гепатиту печінки/неалкогольного стеатогепатиту знаходиться на завершальній стадії розгляду. У світі розробляється вісім агоністів GLP-1R/GIPR/GCGR, з яких Retatrutide від Rita досяг найшвидшого прогресу та розпочав третю фазу клінічних випробувань у червні цього року. У тому ж місяці Ріта оголосила, що на щорічній зустрічі ADA були опубліковані дані другого етапу дослідження ретатрутиду, які показали, що через 24 тижні ретатрутид (1 мг, 4 мг, 8 мг або 12 мг) досяг основної кінцевої точки ефективності. оцінка для учасників із ожирінням або надмірною вагою без діабету, із середньою втратою ваги 17,5%. Серед вторинних кінцевих точок середня втрата ваги на 24,2% була досягнута наприкінці 48 тижнів лікування. Ми також синтезували пептид у лабораторії на основі опублікованого методу. Конкретний метод синтезу буде коротко описано, а конкретні кроки можна надіслати нам електронною поштою.
Спосіб 1:
Детальні етапи синтезу ретарутиду за допомогою твердотільного синтезу в лабораторії такі:
Підготуйте необхідні реагенти та інструменти: включаючи амінокислоти, дихлорметан, карбонат калію, етоксильований силікагель, ацетонітрил, піридин, N-метилморфолін, джерело диізопропілетилхлориду, трифтороцтову кислоту, DIPEA, захищені амінокислоти Boc та інші реагенти, а також магнітні мішалки , роторні випарники та інші прилади.
(1) Синтез Boc-захищених амінокислот: розчиніть необхідні амінокислоти в дихлорметані, додайте порошок карбонату калію, рівномірно перемішайте, додайте етоксильований силікагель, продовжуйте перемішувати, а потім додайте піридин і N-метилморфолін, щоб отримати Boc-захищені амінокислоти.
(2) Твердофазний синтез: змішайте разом ацетонітрил, джерело диізопропілетилхлориду та трифтороцтову кислоту, рівномірно перемішайте, додайте підготовлені Boc-захищені амінокислоти та продовжуйте перемішувати, щоб отримати продукт твердофазного синтезу.
(3) Група зняття захисту: розчиніть твердофазний синтез у дихлорметані, додайте трифтороцтову кислоту, рівномірно перемішайте, а потім додайте DIPEA. Продовжуйте перемішувати, щоб отримати твердофазний синтез без захисту.
(4) Очищення: розчиніть твердофазний синтез без захисту у воді, доведіть рН приблизно до 9.0 розчином гідроксиду натрію, потім доведіть рН приблизно до 5.0 оцтовою кислотою і, нарешті, осаджують чистий продукт ефіром.
Спосіб 2:
Детальні етапи синтезу ретарутиду за допомогою рідкофазного синтезу в лабораторії такі:
Підготуйте необхідні реагенти та інструменти: аргінін, гліцин, оцтовий ангідрид, триетиламін, карбонат калію, дихлорметан, метанол, піридин, N-метилморфолін, оцтовий ангідрид, ацетат натрію та інші реагенти, а також такі інструменти, як мішалки, ділильні воронки, вакуумні насоси, печі та хроматографічні колонки.
(1) Розчиніть аргінін і гліцин у відповідній кількості дихлорметану, додайте відповідну кількість оцтового ангідриду та триетиламіну та рівномірно перемішайте мішалкою.
(2) Перенесіть розчинену суміш у духовку та нагрійте її при 80°C протягом 1 години для ацетилювання амінокислотних залишків.
(3) Нейтралізуйте прореагував розчин порошком карбонату калію, щоб нейтралізувати оцтову кислоту в розчині для отримання ацетату натрію, а потім екстрагуйте утворений пептид дихлорметаном.
(4) Промийте розчин екстрагованого пептиду метанолом і відфільтруйте за допомогою вакуумного насоса, щоб отримати неочищений пептид.
(5) Розчиніть неочищений пептид у відповідній кількості піридину та N-метилморфоліну, додайте відповідну кількість оцтового ангідриду та ацетату натрію та рівномірно перемішайте мішалкою.
(5) Відфільтрувати розчин, що прореагував, за допомогою вакуумного насоса, промити осад на фільтрі метанолом, а потім відфільтрувати за допомогою вакуумного насоса, щоб отримати кінцевий Рестарутид.
Спосіб 3:
Детальні етапи синтезу ретарутиду за допомогою хімічних методів у лабораторії такі:
Підготуйте необхідні реагенти та інструменти: аргінін, гліцин, оцтовий ангідрид, триетиламін, карбонат калію, дихлорметан, метанол, піридин, N-метилморфолін, оцтовий ангідрид, ацетат натрію та інші реагенти, а також такі інструменти, як мішалки, ділильні воронки, вакуумні насоси, печі та хроматографічні колонки.
(1) Розчиніть аргінін і гліцин у відповідній кількості дихлорметану, додайте відповідну кількість оцтового ангідриду та триетиламіну та рівномірно перемішайте мішалкою.
(2) Перенесіть розчинену суміш у духовку та нагрійте її при 80°C протягом 1 години для ацетилювання амінокислотних залишків.
(3) Нейтралізуйте прореагував розчин порошком карбонату калію, щоб нейтралізувати оцтову кислоту в розчині для отримання ацетату натрію, а потім екстрагуйте утворений пептид дихлорметаном.
(4) Промийте розчин екстрагованого пептиду метанолом і відфільтруйте за допомогою вакуумного насоса, щоб отримати неочищений пептид.
(5) Розчиніть неочищений пептид у відповідній кількості піридину та N-метилморфоліну, додайте відповідну кількість оцтового ангідриду та ацетату натрію та рівномірно перемішайте мішалкою.
(6) Відфільтрувати розчин, що прореагував, за допомогою вакуумного насоса, промити осад на фільтрі метанолом, а потім відфільтрувати за допомогою вакуумного насоса, щоб отримати остаточний Рестарутид.
Для отримання цільової молекули потрібні численні реакції органічного синтезу. Крім того, цей метод використовує кілька органічних реагентів і складні робочі умови, тому хімічний синтез Ротарутиду в лабораторії зазвичай не підходить для великомасштабного виробництва або промислового застосування. Для великомасштабного виробництва або промислового застосування більш поширеним методом є отримання Ротарутиду за допомогою методів синтезу, таких як біосинтез або рідкофазний синтез, які відносно невеликі в лабораторних масштабах, відносно прості в експлуатації та придатні для приготування невеликих кількостей продуктів. . Ретарутид, отриманий цими методами, подібний або подібний за структурою та біологічною активністю до ретарутиду, синтезованого хімічними методами, але має переваги у вигляді більш високого виходу та легшого приготування. Водночас вони також мають кращий потенціал індустріалізації та ширші перспективи застосування.
Спосіб 4:
Детальні етапи синтезу ретарутиду за допомогою біологічних методів у лабораторії такі:
Підготовка необхідних генів і реагентів: Отримайте плазміди, що містять ген Retatrutide, з бібліотеки генів, трансформуйте плазміди клітинами-реципієнтами (такими як Escherichia coli) і отримайте інженерні бактерії, що містять ген Retatrutide.
(1) Культивування інженерних бактерій: за відповідних умов температури, pH і концентрації іонів використовуйте культуральне середовище для культивування інженерних бактерій, що дозволяє їм розмножуватися у великих кількостях.
(2) Екстракція ретарутиду: культивовані інженерні бактерії подрібнюють за допомогою дробарки, а клітинні фрагменти відокремлюють від ретарутиду за допомогою таких методів, як ультрафільтрація та седиментація, для отримання неочищеного продукту.
(3) Очищення ретарутиду: неочищений ретарутид очищають за допомогою технології хроматографії для отримання ретарутиду високої чистоти.
Виявлення та ідентифікація Ротарутиду: використовуйте високоефективну рідинну хроматографію, мас-спектрометрію, ядерний магнітний резонанс та інші методи для виявлення та ідентифікації структури очищеного Ротарутиду.
Рівняння хімічної реакції для біологічного синтезу ретарутиду в лабораторії в основному включає хімічні реакції під час процесу експресії генів, включаючи два етапи: транскрипцію та трансляцію.
Транскрипція: дволанцюгова ДНК відкривається, використовуючи один ланцюг як матрицю для синтезу ланцюгів РНК, що вимагає участі РНК-полімерази. Рівняння реакції має такий вигляд:
Дволанцюгова ДНК: DNApol → мРНК+DNApol
Переклад: Рибосоми зв’язуються з мРНК для синтезу пептидних ланцюгів, процес, який вимагає участі амінокислот і енергії. Рівняння реакції має такий вигляд:
Рибосома+іРНК → Пептидний ланцюг+ВВП+Pi+H2O
Пептидний ланцюг+АТФ → Пептидний ланцюг+АМФ+PPi
Серед них DNApol являє собою ДНК-полімеразу; МРНК являє собою матричну РНК; Рибосоми представляють рибосоми; Пептидні ланцюги являють собою поліпептидні ланцюги; GDP являє собою гуанозиндифосфат; Pi являє собою неорганічну фосфорну кислоту; H2O представляє воду; АТФ являє собою аденозинтрифосфат; АМФ являє собою аденозинмонофосфат; PPi являє собою неорганічний пірофосфат. Ці реакції генерують пептидні ланцюги, необхідні для синтезу ретарутиду, які потім обробляються та модифікуються на наступних стадіях для отримання ретарутиду.
Вище наведено загальні методи синтезу Ротарутиду в лабораторії, кожен з яких має різні переваги, недоліки та сферу використання. Лабораторія зазвичай використовує методи рідкофазного синтезу та твердофазного синтезу для дрібномасштабного виробництва для дослідницького та експериментального використання; З іншого боку, промислове виробництво використовує комбінацію біосинтезу та виробництва рідкої/твердої фази для великомасштабного виробництва для задоволення ринкового попиту. Слід зазначити, що ці методи вимагають суворої оптимізації умов та контролю процесу для забезпечення якості та чистоти кінцевого продукту.